Embryo development after vitrification of immature and in vitro-matured equine oocytes.

Effects of meiotic stage and cumulus status on development of equine oocytes after vitrification was evaluated. Immature oocytes with corona radiata (IMM); in vitro-matured oocytes with corona radiata (MAT CR+); and in vitro-matured oocytes denuded of cumulus (MAT CR-) were vitrified using the Cryotech® method. Warming medium was equilibrated either in 5% CO2 or Air. IMM oocytes underwent in vitro maturation after warming. Recovery, survival, and maturation rates, and cleavage and blastocyst rates after ICSI, were evaluated. Recovery was higher for oocytes warmed in CO2- than Air-equilibrated medium (86 ± 3 vs. 76.9 ± 4%, respectively). Maturation for all vitrified-warmed oocyte treatments (37 ± 6.5 to 45.9 ± 5.8%) was not different from control (50 ± 4.1%), except for MAT CR- CO2 (20.3 ± 4.6%). Cleavage for MAT CR- CO2 and Air groups was similar to control (67.7 ± 12.1, 71.4 ± 8.1, and 78 ± 5.3%, respectively). One blastocyst was produced (MAT CR + CO2), representing the first equine blastocyst reported after vitrification of an in vitro-matured oocyte.

In vitro embryo production from cumulus-oocyte complexes type II in Bos indicus cattle / Producción in vitro de embriones a partir de complejos cúmulos oocitos tipo II en bovinos Bos indicus / Produção in vitro de embriões de cumulus oócito complexo de tipo II de bovinos Bos indicus

Abstract The morphological selection of cumulus-oocyte complexes (COCs) is an important step for in vitro embryo production. It has been suggested that COC showing signs of atresia have the ability to generate embryos. The objective of this work was to evaluate the effect of COC morphology from Bos indicus animals with signs of early atresia versus no signs of atresia on in vitro embryo production. COC were classified in: Type I (TI): homogeneous ooplasm with ≥ 4 layers of compact cumulus cells (CC) and Type II (TII): granular ooplasm and ≥ 4 layers of CC slightly expanded. The COC were matured in vitro for 24 hours in TCM199 medium and subsequently fertilized in vitro for 18 h. The suspected zygotes were cultured in vitro for seven days in modified SOFaa medium. Embryonic quality was determined by blastomeric count following staining with Hoechst 33342. Student test was used to determine statistical differences for cleavage, blastocyst rate and blastomeric counts between types of COC. The cleavage rate for TI (n = 220) and TII (n = 161) was 88 ± 4% and 89 ± 8% respectively (p> 0.05); embryo development rate was 36 ± 7% and 33 ± 8% (p>0.05) respectively. The blastomeric count for both groups was 101 and 104 cells for TI and TII respectively (n = 10), (p>0.05). These results demonstrate that there is no difference in the quantity and quality of embryos produced in vitro using COC type I or type II, suggesting that both types could be used for bovine in vitro embryo production in Bos indicus cows.

Resumen La selección morfológica de los complejos cúmulo-oocito (COC) es crucial para la producción de embriones in vitro. Se ha sugerido que COC que muestran signos de atresia poseen capacidad de generar embriones. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la morfología de los COC provenientes de animales Bos indicus con signos de atresia temprana y sin signos de atresia sobre la producción de embriones in vitro. Se clasificaron COC obtenidos de ovarios de faenado en dos grupos: Tipo I (TI): ooplasma homogéneo con ≥ 4 capas de células del cumulo (CC) compactas y Tipo II (TII): ooplasma granular y ≥ 4 capas de CC ligeramente expandidas. Los COC fueron madurados por 24 horas en medio TCM199 y posteriormente fueron fertilizados in vitro durante 18 h. Los presuntos cigotos se cultivaron in vitro por siete días en medio SOF modificado. La calidad embrionaria se determinó por conteo de blastómeras posterior a tinción con Hoechst 33342. Se usó la prueba t para determinar diferencias estadísticas. La tasa de clivaje para los COC, TI (n=220) y TII (n=161), fue 88 ± 4% y 89 ± 8% respectivamente (p>0,05); la tasa de desarrollo embrionario fue 36 ± 7% y 33 ± 8% (p>0,05) respectivamente. El conteo de blastómeras para ambos grupos fue de (TI:101,TII:104) (n=10), (p>0,05). Los resultados de este trabajo permiten concluir que no hay diferencia en la cantidad y calidad de embriones producidos in vitro utilizando COC tipo I o tipo II, sugiriendo que ambas calidades podrían ser usadas en la producción de embriones in vitro a partir de animales Bos indicus.

Resumo A seleção morfológica dos complexos cumulus-oócito (COC) é crucial para a produção in vitro de embriões. Relata-se que COC que apresentam sinais de atresia têm a capacidade de gerar embriões. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito morfológico dos COC de animais Bos indicus com sinais de atresia precoce ou sim sinais de atresia sobre a produção in vitro de embriões. COC obtidos de ovários de animais abatidos foram classificados em dois grupos: tipo I (TI): ooplasma homogéneo com ≥ 4 camadas de células do cúmulos (CC) compactos e Tipo II (TII): ooplasma granular e ≥ 4 camadas CC levemente expandidas. Os COC foram submetidos à maturação por 24 horas em meio TCM199 e depois fertilizados in vitro por 18 h. Os prováveis zigotos foram cultivados in vitro por sete dias em meio SOFaa modificado. A qualidade embrionária foi determinada pela contagem dos blastômeros após coloração com Hoechst 33342. O teste t foi utilizado para determinar diferenças estatísticas significativas. A taxa de clivagem para os COC TI (n = 220) e TII (n = 161) foi de 88 ± 4% e 89 ± 8%, respectivamente (p>0,05); a taxa de desenvolvimento embrionário foi de 36 ±7% e 33 ±8% (p>0,05), respectivamente. E a contagem de blastômeros para ambos os grupos foi (TI: 101, TII: 104) (n = 10) (p>0,05). Com base nos resultados deste trabalho conclui-se que não existe diferença na quantidade e qualidade dos embriões produzidos in vitro, utilizando COC tipo I ou tipo II, sugerindo que ambas as qualidades podem ser utilizadas na produção in vitro de embriões em animaes Bos indicus.

Técnicas de reproducción asistida en caballos / Assisted reproductive technologies in the horses / Técnicas de reprodução assistida em cavalos

Las técnicas de reproducción asistida son métodos no convencionales por los cuales se obtienen potros deyeguas problema o geriátricas mediante la obtención de oocitos viables. De esta manera, los problemas del úteroo del oviducto que impiden un buen transporte y sobrevivencia de los espermatozoides, adecuada fertilizacióny consecuentemente transporte del embrión, son sobrepasados. Existen primordialmente dos métodos paracolectar oocitos en yeguas – a partir del folículo pre-ovulatorio dominante o de todos los folículos visiblesen los ovarios. Además existen dos métodos para fertilizar los oocitos que han sido obtenidos: in vitro, porinyección intracitoplasmatica de un espermatozoide (ICSI) o in vivo, al transferirlo al oviducto de una yeguareceptora inseminada previamente (Transferencia de oocitos)

Assisted reproductive technology (ART) refers to non-conventional methods for obtaining foals by obtainingisolated oocytes in problematic or geriatric mares. In this way, problems with the mare’s uterus or oviductthat limit proper sperm transport and survival, adequate fertilization, and consequently embryo transportare bypassed. There are two main methods to recover oocytes from a valuable mare – from the dominantpreovulatory follicle, or from all visible follicles on the ovaries. In addition, there are two main methods tofertilize the recovered oocytes: in vitro, by intracytoplasmic sperm injection (ICSI) or in vivo, by transferringit to the oviduct of a previously inseminated recipient mare (Oocyte Transfer)

As técnicas de reprodução assistida são métodos não-convencionais para a obtenção de potros de éguasproblemáticas ou geriátricas, através da retirada de ovócitos viáveis. Assim, os problemas do útero ou do ovídutoque impedem o transporte e a sobrevivência de espermatozoides, a fertilização adequada e, consequentemente,o transporte do embrião são evitados. Existem principalmente dois métodos para coletar ovócitos em éguas– a partir do folículo pré-ovulatório dominante, ou de todos os folículos visíveis nos ovários. Há tambémdois métodos para fertilizar os ovócitos que foram obtidos: in vitro, através de injeção intracitoplasmáticade espermatozoides (ICSI) ou in vivo, transferido-os para o oviduto de uma égua destinatária previamenteinseminada (Transferência de ovócitos).